紫外分光光度計(jì)的工作原理基于朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律,即物質(zhì)在一定濃度 的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比,其應(yīng)用波長范圍為200~400nm的紫外光區(qū)、400~850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源(光源)、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。紫外分光光度計(jì),就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。紫外分光光度計(jì)可以在紫外可見光區(qū)任意選擇不同波長的光。物質(zhì)的吸收光譜就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子 、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量。紫外分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng):(1)使用的吸收池必須潔凈,并注意配對(duì)使用。量瓶、移液管均應(yīng)校正、洗凈后使用。(2)取吸收池時(shí),手指應(yīng)拿毛玻璃面的兩側(cè),裝盛樣品以池體的4/5為度,使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應(yīng)無溶劑殘留。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意方向相同。用后用溶劑或水沖洗干凈,晾干防塵保存。(3)供試品溶液濃度除各該品種已有注明外,其吸收度以在0.3~0.7之間為宜。(4)測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照,采用1cm石英吸收池,在規(guī)定的吸收峰±2nm以內(nèi),測(cè)幾個(gè)點(diǎn)的吸收度或由儀器在規(guī)定的波長附近自動(dòng)掃描測(cè)定,以核對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確,并以吸收度zui大的波長作為測(cè)定波長,除另有規(guī)定外吸收度zui大波長應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的測(cè)定波長±2nm以內(nèi)。(5)供試品應(yīng)取2份,如為對(duì)照品比較法,對(duì)照品一般也應(yīng)取2份。平行操作,每份結(jié)果對(duì)平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。
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